Курсовая №4027 Микробиологическая диагностика энтерококковой инфекции
СОДЕРЖАНИЕ:
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Историческая справка
1.2 Общие сведения
1.2.1 Морфологические свойства
1.2.2 Культуральные свойства
1.2.3 Ферментативная активность
1.2.4 Устойчивость
1.2.5 Пути передачи
1.2.6 Классификация
1.3 Патогенез
1.4 Клиническая картина
1.5 Лечение
1.6 Профилактика
1.7 МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ
1.7.1 Микробиологические методы исследования
1.7.2 Иммунологические методы исследования
1.8 Вывод
1.9 Литература
Цель:
Изучение микробиологической диагностики энтерококковой инфекции.
Задачи:
1. Изучить морфологическую характеристику энтерококка
2. Рассмотреть клиническую картину при энтерококке
3. Изучить патогезен заражения энтерококком
4. Рассмотреть методы профилактики и лечения энтерококка
5. Ознакомится с методами диагностики энтерококка
ВВЕДЕНИЕ
Энтерококки, входящие в состав нормальной микрофлоры пищеварительного тракта человека, играют важную роль в обеспечении колонизационной резистентности слизистых. В то же время они являются представителями группы условно-патогенных бактерий, способных вызывать аутоинфекцию, а при накоплении в окружающей среде – приводить к экзогенному инфицированию. В последние годы изучение энтерококков как биологических объектов и оценка их роли в физиологии и патологии человека чаще всего рассматриваются сквозь призму участия энтерококков в возникновении инфекционных заболеваний, количество которых постоянно нарастает. Однако односторонняя оценка микроорганизмов зачастую не позволяет объективно оценить их значение, так как многие из них являются составной частью нормальной микрофлоры и обязательными компонентами привычных пищевых продуктов. Обнаружение у больного энтерококков часто ставит неразрешимые вопросы перед клиницистами в плане определения врачебной тактики. Возник вопрос о безопасности применения в медицинской практике препаратов-пробиотиков, содержащих жизнеспособные симбиотические энтерококки. Так же энтерококк является санитарно-показательным микроорганизмом и используются при оценке санитарного состояния объектов внешней среды – питьевой воды, сточных вод. Ряд исследователей считает энтерококк более чувствительным показателем фекального загрязнения, чем кишечную палочку, поскольку энтерококк практически не размножается вне организма человека или животного. Метод определения энтерококков включен ВОЗ в Международный и Европейский стандарты исследования питьевой воды.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Историческая справка.
До 1984 года бактерии рода Enterococcus классифицировались как стрептококки группы Д, пока методом геномного анализа ДНК не было показано, что правильно будет выделить их в отдельный род. Энтерококк первые был описан Эшерихом в 1886 г., когда им был выделен кокк из кишечника младенца, названный им за его удлиненную форму овальным микрококком. В течение первых 25 лет этот микроб не привлек внимания бактериологов и считался безобидным сапрофитом. Однако его частое присутствие в качестве сапрофита в организме человека, особенно в кишечнике и мочеполовом тракте, а также несомненная патогенность повели к тщательному изучению его свойств. Название энтерококк не сразу утвердилось за этим микробом; лишь в 1889 г. французский ученый Тирселен выделил аналогичного кокка при энтеритах с нагноениями и дал ему название «энтерококк» оставшееся и в настоящее время за этим микробом.
1.2 Общие сведения
Энтерококки, с одной стороны, являются возбудителями инфекций мочевыводящих путей, интраабдоминальных инфекций, инфекций органов малого таза, раневых инфекций, эндокардита, на их долю приходится существенное количество внутрибольничных инфекций (6 % от всех внутрибольничных инфекций мочевыводящих путей, 12 % — раневых инфекций и 9 % — внутрибольничных инфекций кровотока). С другой стороны, энтерококки входят в состав нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта человека и многих позвоночных, играют важную роль в обеспечении колонизационной резистентности слизистой оболочки. Энтерококки колонизируют преимущественно тонкую кишку, но также в заметном количестве встречаются в толстой кишке, губчатой части мочеиспускательного канала, в половых органах и, иногда, в полости рта.
В клиническом материале 80–90 % от всех выделенных у человека энтерококков составляют Enterococcusfaecalis. На втором месте Enterococcusfaecium —5 –10 %, остальные энтрококки относятся к Enterococcusgilvus и Enterococcuspallens.
В количественном отношении в толстой кишке энтерококки составляют менее 1 % от общего числа бактерий, проигрывая, например, бифидобактериям примерно в 100 раз или более. У
детей раннего возраста количество энтерококков на 1 г фекалий 106—107, у взрослых — 107—108, у пожилых — 106—107.
Энтерококки заселяет кишечник человека в первые дни жизни, причём это заселение происходит более активно у детей, находящихся на грудном вскармливании.
1.2.1Морфологические свойства:
Энтерококки имеют форму слегка вытянутых кокков, располагающихся парно или короткими цепочками, наружные концы их заострены, величина кокков колеблется от 0,6 до 2,0 мкм. В отличие от стрептококков среди энтерококков есть штаммы, обладающие подвижностью(имеют небольшие жгутики) . По Граму окрашиваются положительно, эндоспор не образуют. Четкая капсула отсутствуе
1.2.2Культуральные свойства:
Энтерококки – факультативные анаэробы. За счет энергии брожения способны жить как при высокой, так и при низкой концентрации кислорода. Диапазон температур для роста от 10 до 45°С, оптимальная температура – 35-37°С. На кровяном агаре (40% желчи, рН 7,4) растут мелкие колонии, прозрачные, со слабо-коричневой окраской. На мясо-пептонномагаре с углеводами и рН 7,4 энтерококки образуют три типа колоний:
1) мелкие, прозрачные, размером 0,5—0,6 мм, выпуклые, гладкие с блестящей поверхностью, ровными краями, под микроскопом почти бесструктурные;
2) более крупные, прозрачные, размером до 1 мм, выпуклые, с гладким краем, блестящей поверхностью, под микроскопом мелкозернистые;
3) крупные и средние, размером 0,7—1,2 мм, прозрачные с беловато-мутным центром, края гладкие, поверхность блестящая, под микроскопом мелкозернистые.
Характерная особенность энтерококков — их способность при массивном посеве давать сплошной газон в отличие от стрептококков, растущих даже при густом посеве изолированными колониями.
1.2.3. Ферментативная активность
Биохимические свойства энтерококков отличаются непостоянством и значительным разнообразием в отношении сбраживания углеродных соединений. Они могут в зависимости от условий культивирования проявлять различную биохимическую активность в отношении одного и того же углевода. Поэтому биохимические свойства энтерококков не всегда учитывают при определении их видовой принадлежности. Наиболее стабильными свойствами можно считать: способность к разжижению желатина, сбраживанию маннита, сорбита, эскулина, сворачивание молока.
1.2.4 Устойчивость к факторам внешней среды:
Энтерококки высокорезистентны к различным факторам внешней среды и дезинфицирующим средствам, могут длительное время сохранять жизнеспособность на предметах домашнего обихода, в течение нескольких месяцев — на
обычных агаровых косяках, выдерживают нагревание до 60°С в течение 30 минут.
Энтерококк может жить практически где угодно, потому что он способен жить и в среде с кислородом и без него. Температура тела человека для него очень даже комфортная.
1.2.6 Пути передачи:
Патогенные виды (например, фекальный энтерококк) передаются контактно-бытовым путем: с грязными руками, через загрязненные личные вещи, продукты питания, воду. Зачастую эти микроорганизмы выявляются в анализе кала на микрофлору (анализе на дисбактериоз). Половым путем (в стандартном понимании данного термина) энтерококк не передается. Правильнее говорить о его внесении в половые пути при игнорировании элементарных гигиенических принципов в случае последовательной смены вариаций половых контактов. Заражение мочеполовых органов происходит также вследствие попадания в них кишечного содержимого из-за некачественной гигиены. Восходящим путем патогенные микроорганизмы могут проникнуть в мочевой пузырь или почки и стать причиной развития пиелонефритов.
Первое заражение происходит, когда ребенок впервые начинает сосать грудь матери в роддоме.
В больнице.
Нарушение микрофлоры кишечника.
Нарушение обменных процессов в организме.
Порезу, ушибы, ранения.
Если заражение произошло во взрослом возрасте, то это всегда означает, что иммунитет ослаблен.
Но при всем негативном действии, энтерококки входят во многие лекарственные препараты, пробиотики, которые помогают восстановить микрофлору кишечника. Это непатогенные микробы, которые несут пользу для человека.
1.2.4.Классификация:
E. faecalis- наиболее частыйизолят клинических проб из кишечника человека, обнаруживается также в кишечнике домашней птицы, крупного рогатого скота, свиней, собак, лошадей, овец и коз
E. faecium — Выявляется в клинических пробах от людей; более резистентен к антимикробным средствам, чем Е. faecalis; также выявляется в кишечнике разных видов животных
E. avium — Выделяют из кишечника птиц, собак, человека, штаммы могут иметь групповые D- и G-антигены по Лэнсфилду, образуют H2S
E. durans — Редкий клинический изолят: обнаруживают главным образом в молоке и других молочных продуктах
E. casseliflavus- Выявляют в растениях, почве и редко – в фекалиях цыплят; первоначально классифицировали как подвид Е. faecium; продуцирует желтый пигмент, подвижен; может выделяться при инфекциях у человека
E. gallinarum — Изолируют из фекалий цыплят; один из двух подвижных видов Enterococcus; также был изолирован при инфекциях людей, подвергавшихся гемодиализу
E. raffinosus — Первоначально рассматривался как Е. avium (вместе с Е. solitarius и Е. pseudoavium); назван за свою способность продуцировать кислоту из раффинозы; выделяют при инфекциях человека, включая культуры из крови, мочи и абсцессов
E. dispar — Первоначально считали биохимическим вариантом Е. hirae, но анализ сиквенса 16S РНК показал, что он является новым видом; обнаруживают в пробах от человека (в фекалиях, синовиальной жидкости)
E. flavescens- Новый, образующий желтый пигмент подвижный вид; изолирован из проб от человека (крови, абсцессов и гнойного отделяемого больных остеомиелитом)
Наиболее патогенны для человека Enterococcusfaecalis(фекальный энтерококк), Enterococcusfaecium (энтерококк фэциум) и Enterococcusdurans
1.3 Патогенез
Колонизация слизистых оболочек основное условие развития энтерококковой инфекции. Энтерококки, колонизируют слизистую оболочку ЖКТ у здоровых людей, входя в состав микрофлоры фекалий (103—108 колониеобразующих единиц в 1 г). Между энтерококками и эпителиальными клетками организма хозяина существует тесная связь, которая препятствует выведению их вследствие естественной подвижности кишечника. Большинство известных микроорганизмов растет в узком диапазоне значений pH, близких к нейтральному. Энтерококки должны преодолеть кислую среду желудка, чтобы попасть в нижние отделы кишечника, что возможно благодаря устойчивости этих микробов к низким значениям pH среды их обитания (pH 3,2-4,8 в течение 15-30 мин), через стенки кишечника энтерококк попадает в лимфатическую систему,в следствии чего происходит его распостранение по организму. Так же Инфекционный возбудитель проникает и распострянается через кровеносную систему
1.4 Клиническая картина:
1.Резкие боли в области уретры или всего паха.
2.Болевые ощущения, сопровождающие процесс дефекации.
3.Частые позывы к мочеиспусканию.
4.Явные проблемы с эякуляцией и эрекцией.
5.Изменение внешнего вида мочи
6.Появление бело-зеленых выделений.
7.Трудности при мочеиспускании.
8.Снижение либидо и потенции.
9.Общие симптомы, в том числе чрезмерная утомляемость, депрессия и слабость.
10.Дивертикулит,
11.Менингит,
12.Бактериемия,
13.Септический артрит,
14.Поражения мочеполовой системы,
15.Эндокардит,
16.Остеомиелит,
17.Интраабдоминальные инфекции,
18.Инфекции дыхательных путей
К энтерококковой инфекции предрасполагают пожилой возраст, тяжелые заболевания, нарушения барьерной функции кожи и слизистых, подавление нормальной микрофлоры антибиотиками.
Энтерококки часто вызывают инфекции мочевых путей , особенно у больных, получавших антибиотикотерапию и подвергавшихся инструментальным исследованиям мочевых путей. Инфекционный эндокардит , в том числе протезированных клапанов, в 10-20% случаев имеет энтерококковую этиологию. Обычно это подострый эндокардит, но возможен и острый, с быстрым разрушением клапанов.
Энтерококков нередко высевают из желчи. Они служат причиной инфекционных осложнений операций на желчных путях и абсцессов печени .
Энтерококков часто обнаруживают и при смешанных инфекциях абсцессах брюшной полости , вызванных кишечной микрофлорой, инфицированных операционных ранах брюшной стенки , диабетической стопе . Такие смешанные инфекции часто излечиваются антимикробными препаратами, неактивными в отношении энтерококков. Однако, если энтерококки выделены из крови или преобладают в посеве из очага инфекции, необходимо использовать препараты, к которым они чувствительны.
1.5 Лечение
Процесс назначения лечения обычно начинается с диагностики и подтверждения диагноза. Для постановки диагноза необходимо проведение ряда исследований, так как большинство симптомов, сопровождающих поражение слизистых фекальным энтерококком, являются общими для многих видов инфекционных заболеваний мочеполовой системы у мужчин.
После подтверждения диагноза требуется серьезное и довольно длительное лечение. Лечение фекальной энтерококковой инфекции осложнено тем, что эти микроорганизмы чрезвычайно жизнестойки, поэтому после постановки такого диагноза стоит обратиться к высококвалифицированному врачу, способному подобрать наиболее оптимальную медикаментозную составляющую, так как в противном случае невылеченная инфекция перейдет в хроническую форму и будет проявляться каждый раз, когда иммунная система будет ослаблена. Можно выделить 3 аспекта лечения воспалительного процесса, вызванного фекальной энтерококковой инфекцией:
1. Антибактериальная терапия. Так как энтерококк фекалис невосприимчив к антибиотикам тетрациклиновой группы, назначается длительный срок применения препаратов-бактериофагов. Препараты подбираются на основе данных о штамме бактерий и их восприимчивости к тем или иным средствам.
2.Использование препаратов местного назначения. К средствам местного воздействия относятся гели, мази, свечи, которые способствуют нормализации микрофлоры и скорейшему заживлению поврежденных тканей слизистой органов половой системы. Кроме того, для стимуляции кровотока в простате и других органах мочеполовой системы у мужчин может быть назначен курс массажа простаты. Эти средства позволяют существенно снизить риск развития осложнений, а также увеличить площадь поражения слизистой оболочки.
3.Меры, направленные на стимуляцию иммунной системы. При диагностировании воспалительного процесса, вызванного энтерококком фекалис, необходим прием витаминно-минеральных комплексов, способствующих улучшению общего состояния организма и иммунной системы.
При тяжелых энтерококковых инфекциях определяют чувствительность возбудителя и на ее основании выбирают схему антимикробной терапии
Большинство штаммов энтерококков устойчиво к стрептомицину . Не имея данных о чувствительности возбудителя, этот препарат при энтерококковой инфекции не используют.
Распространена среди энтерококков и устойчивость к гентамицину ( МПК более 2000 мкг/мл). Однако устойчивые к гентамицину штаммы могут оказаться чувствительными к другим аминогликозидам , в том числе к стрептомицину . Если возбудитель устойчив ко всем аминогликозидам , может оказаться успешной монотсрапиябензилпенициллином или ампициллином .
Эндокардит, вызванный устойчивыми ко всем аминогликозидам энтерококками, рекомендуется лечить большими дозами ампициллина (12 г/сут) в течение как минимум 6 нед.
Лечение инфекций, вызванных устойчивыми к антибиотикам энтерококками
Тип устойчивости Рекомендуемые препараты
Устойчивость к b-лактамным антибиотикам, обусловленная образованием b-лактамаз Гентамицин + ампициллин/сульбактам, амоксициллин/клавуланат, имипенем/циластатин или ванкомицин
Устойчивость к b-лактамным антибиотикам, обусловленная изменением структуры пенициллинсвязывающих белков Гентамицин + ванкомицин
Устойчивость к гентамицину Штаммы, чувствительные к стрептомицину: стрептомицин + ампициллин или стрептомицин + ванкомицин.
Штаммы, устойчивые к стрептомицину: в/в инфузияампициллина, длительное лечение (эффективность не подтверждена)
Устойчивость к ванкомицину Ампициллин + гентамицин
Устойчивость к ванкомицину и b-лактамным антибиотикам Штаммы, умеренно устойчивые к ванкомицину (фенотипы VanB и VanC): тейкопланин. Для остальных случаев рекомендаций нет
1.6 Профилактика
Профилактика пищевых токсикоинфекцийэнтерококковой этиологии такая же, как и других пищевых токсикоинфекций, и заключается в соблюдении требований, предъявляемых к правильному хранению, транспортировке, реализации и приготовлению пищевых продуктов и готовой пищи, выполнению правил личной гигиены обслуживающим персоналом предприятий пищевой промышленности и общественного питания.
1.7 «МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ»
1.7.1 Микробиологические методы исследования:
1) Тест с Азид глюкозным бульоном(среда Марк Миллипор):
Среда используется как предварительный тест на энтерококки и для их селективного накопления.
Принцип действия:
Концентрация азида натрия в бульоне существенно подавляет рост сопутствующих грамотрицательных бактерий, не затрагивая энтерококков. Об использовании азида натрия в качестве селективного агента для грамотрицательных бактерий сообщается в работах Edwards (1933, 1938), Hartmann (1936) по выделению Str.agalactiae. Mallmann (1940), Snyder и Lichstein (1940) позднее показали, что азид натрия может быть использован и для выделения энтерококков из воды. Присутствие энтерококков (Е.faecalis, S.durans, S.bovis, S.equinus) служит индикатором фекального загрязнения, особенно давнего, когда менее устойчивые колиформные бактерии, в том числе Е. coli, погибли до момента анализа.
Состав (г/л):
Казеиновый пептон 15,0; мясной экстракт 4,5; глюкоза 7,5; хлористый натрий 7,5; азид натрия 0,2.
Приготовление:
Растворить 35 г или 70 г (бульон двойной концентрации) в 1 литре воды дистиллированной воды, разлить в пробирки, стерилизовать 15 мин при 121°С.
Не перегревать!
рH 7,2±0,2 при 25 °С.
Готовая среда прозрачная, желтовато-коричневого цвета.
Проведение анализа:
Малые объемы образца (до 1 мл) могут быть внесены в бульон нормальной концентрации. Большие объемы (10 мл и больше) следует смешивать с равным количеством бульона двойной концентрации.
Инкубация 24-48 ч при 35°С в аэробных условиях.
Если бульон мутнеет вследствие микробного роста, то это, скорее всего, означает присутствие энтерококков. Полученную культуру необходимо пересеять на бульон с бромкрезоловым пурпурным и азидом натрия. Отсутствие помутнения на этой среде означает отсутствие энтерококков.
2)Посев на селективныйагарСланетца-Бертли:
Принцип действия:
Рост сопутствующей микрофлоры подавляется азидом натрия. Энтерококки восстанавливают ТТХ до формазана (красного цвета), поэтому их колонии окрашиваются в красный цвет. Селективные свойства среды можно усилить добавлением карбоната и Твина-80.
Состав (г/л):
Триптоза 20,0; дрожжевой экстракт 5,0; глюкоза 2,0; калий фосфорнокислый двузамещенный 4,0; азид натрия 0,4; 2,3,5-трифенилтетразолий-хлорид 0,1; агар-агар 10,0.
Приготовление:
Растворить 41,5 г среды в 1 литре дистиллированной воды, стерилизовать текучим паром 20 мин, после чего немедленно охладить.
Среда не подлежит автоклавированию!
Среда прозрачная, желтовато-коричневая. Может появиться красноватый оттенок. Разлить в чашки рН 7,2±0,2 при 25°С.
Проведение анализа:
Мембранные фильтры размещают на поверхности агара. Инкубация до 48 ч при 35°С аэробно. Энтерококки образуют колонии диаметром от 0,5 до 2 мм цветом от розового до коричневого цвета.
3)Агар с канамицином, эскулином и азидом натрия:
Для выделения, дифференциации и учета энтерококков в пищевых продуктах, воде и других материалах по Моssel (1979).
В отличие от питательных сред, содержащих желчь и проявляющих иногда переменчивую селективность в отношении D-стрептококков, среда с канамицином, эскулином и азидом натрия всегда высокоселективна для энтерококков.
Принцип действия:
Канамицин и азид натрия в значительной степени подавляют рост сопутствующей бактериальной флоры. D-стрептококки слабо чувствительны к этим веществам, поэтому растут почти нормально, гидролизуютэскулин с образованием глюкозы и эскулетина. Эскулетин образует комплекс с трехвалентным железом, окрашенный в цвета от оливково-зеленого до черного.
Состав (г/л):
Казеиновый пептон 20,0; дрожжевой экстракт 5,0; хлористый натрий 5,0; цитрат натрия 1,0; азид натрия 0,15; канамицин-сульфат 0,02; эскулин 1,0; цитрат аммонийного железа; агар-агар 15,0.
Приготовление:
Растворить 47,5 г/л воды, автоклавировать 15 мин при 121°С и разлить в чашки.Не перегревать!
рH 7,1±0,2 при 25°С.Среда в чашках прозрачная, голубовато-коричневая.
Проведение анализа:
Среду засевают поверхностным методом. Инкубация до 3 дней при 35°С или 42°С аэробно. Более высокая температура усиливает селективность среды. Колонии энтерококков окружены темной зоной. Для подтверждения необходимо провести тесты на наличие каталазы, утилизацию глюкозы, рост при температуре 45±1°С.
4)Хромогенный бульон на энтерококки:
Хромогенный бульон используется как тест на наличие энтерококков, а также для селективного накопления при анализе воды.
Принцип действия:
Присутствие энтереококков и D-стрепококков служит индикатором фекального загрязнения. Наличие энтерококков является более характерным признаком фекального загрязнения по сравнению с наличием колиформных бактерий. Колиформные бактерии не всегда бывают фекального происхождения; энтерококки происходят только из фекалий человека и животных. Концентрация азида натрия в бульоне в значительной степени подавляет рост сопутствующих, особенно грамотрицательных бактерий. Хромогенный субстрат X-GLU (5-бром-4-хлор-3-инолил-β-D-глюкопиранозид) расщепляется β-D-глюкозидазой энтерококков. Это вызывает интенсивное сине-зеленое окрашивание бульона. Наличие азида натрия предотвращает ложно-положительную реакцию действия β-D-глюкозидазы других бактерий. Изменение цвета среды указывает на наличие энтерококков и D-стрептококков в воде.
Состав (г/л):
Пептоны – 8,6; хлорид натрия — 6,4; азид натрия — 0,6; хромогенный субстрат — 5-бром-4-хлор-3-инолил-β-D-глюкопиранозид (X-GLU) 0,04; твин 80 – 2,2;
Приготовление:
Растворить 18,0 г или 36,0 г (двойная концентрация) среды в 1 литре дистиллированной воды, распределить по флаконам и пробиркам. Автоклавировать 15 минут при 121оС.
рН: 7,5±0,2 при 25оС.Готовая среда прозрачная, желтоватого цвета.
Проведение анализа:
Малые объемы проб воды (1 мл) засевают в бульон обычной концентрации, большие – 10 мл и более – смешивают с равным объемом среды двойной концетрации.
Инкубация: 24±4 часа при 35-37оС или 44оС. При отсутствии изменений цвета среды или видимого роста продлевают инкубацию до 44±4 часов.
Интенсивное сине-зеленое окрашивание бульона указывает на присутствие энтерококков и D-стрептококков. Видимое помутнение среды из-за роста должно быть очень слабым.
5)Хромогенныйагар на энтерококки:
селективная среда для выделения, дифференциации и подсчета энтерококков в воде, пищевых продуктах и др. образцах. Наличие энтерококков в воде, особенно E.faecalis, E.faecium, E.durans и E.hirae является индикатором фекального загрязнения.
Принцип действия:
Рост энтерококков усиливается в результате тщательно отобранного состава пептонов, добавлением в среду фосфатов и твина 80. Азид натрия и соли желчных кислот ингибируют рост сопутствующей микрофлоры.
Среда содержит специфические хромогенные субстраты – энтерококки растут в виде красных колоний и легко дифференцируются от других колоний (бесцветные, синие/фиолетовые или бирюзовые) микроорганизмов. Энтерококки расщепляют специфические хромогенные субстраты, входящие в состав среды, приводя к красному окрашиванию колоний, что позволяет их легко дифференцировать от колоний других микроорганизмов.
Состав (г/л):
Пептоны — 10,0; хлорид натрия — 5,0; азид натрия — 0,2; гидрофосфат калия — 3,4; дигидрофосфат калия — 1,6; бычья желчь — 0,5; твин 80 — 1,0; хромогенная смесь – 0,25; агар-агар – 11,0; рН: 7,0±0,2 при 25оС.
Ход исследования:
Посев материала проводят методом глубинного посева или распределяя образец по поверхности среды. Кроме того, можно использовать метод мембранной фильтрации. В этом случае фильтр помещают на поверхность агаризованной среды. Инкубируют 24 часа при 35-37оС. При отрицательном ответе продолжить инкубацию до 44±4 часов для получения окончательного отрицательного результата.
Оценка результатов:
Энтерококки: красные колонии диаметром 0,5-2 мм. Другие бактерии: бесцветные (Aerococcusviridans ATCC 29503); сине-фиолетовые (Aerococcusviridans ATCC 10400); бирюзовые (Streptococcusequi ATCC 33398). Проведение дополнительных тестов не требуется.
Бактериологический метод:
энтерококки хорошо растут на кровяном и шоколадном агаре. Чистая культура идентифицируется по биохимическим и культуральным признакам.
1.7.2 Иммунологические методы исследования
1) ИФА ( иммуноферментный анализ)
лабораторный иммунологический метод выявления антигенов и антител,
основанный на определении комплекса «антиген-антитело» за счет введения в один из ком-
понентов реакции ферментативной метки с последующей ее детекцией с помощью соответ-
ствующего субстрата, изменяющего свою окраску. Основой проведения любого варианта
ИФА служит определение продуктов ферментативных реакций при исследовании тестируе-
мых образцов в сравнении с негативными и позитивными контролями
Методы:
1. Сэндвич – метод
2. Непрямой ИФА
3. Конкурентный метод К
4. Ингибирующий ИФА
5. Прямой ИФА
2)ПЦР (полимеразная цепная реакция)
экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе)
В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате нарабатываются количества ДНК, достаточные для визуальной детекции. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце.
Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.
Вывод:
Энтерококки занимают важное место среди возбудителей инфекций мочевых путей , абсцессов брюшной полости , инфекционного эндокардита .
Энтерококки, ранее относимые к стрептококкам группы D , на основании строения ДНК выделены в особый род. Соответственно изменены и их названия. Так, Streptococcusfaecalis теперь называется Enterococcusfaecalis , Streptococcusfaecium — Enterococcusfaecium .
Это грамположительные кокки , обычно живущие в ЖКТ, губчатой части мочеиспускательного канала и иногда в полости рта. По классификации Лансфилд все они относятся к группе D. Энтерококки обладают умеренной устойчивостью к бензилпенициллину; бактерицидного действия удается достичь, только комбинируя его с аминогликозидами.
Литература;
1. Романов В. и Романова М., О биологических и патогенных свойствах энтерококка, Журн
2. (Бондаренко В.М., Суворов А.Н. Симбиотические энтерококки и проблемы энтерококковой оппортунистической инфекции
3. Билимова С.И. Характеристика факторов персистенции энтерококков. Журн. микробиол. 2000, 4: 104, 105.
4. Бондаренко В.М. Поликомпонентныепробиотики: механизм действия и терапевтический эффект при дисбиозах кишечника. Фарматека. 2005, 20 (115): 46–54.
5. Бондаренко В.М. «Острова» патогенности бактерий. Журн. микробиол. 2001, 4: 67–74.
6. Симбиотические энтерококки и проблемы энтерококковой оппортунистической инфекции http://medi.ru 25.11.2014
7. Биологические свойства энтерококков, выделенных из кишечника детей с разной степенью дисбактериоза http://bibliofond.ru 15.06.2014